AF高度激活
?在LM中观察到aSMA、p-MLC2和COL-I的显着更高表达，表明MAF的肌成纤维细胞和ECM重塑特征
?接下来，从CRC患者的pTU(CAF)和LM(MAF)中分离出原代成纤维细胞pytxt♀ccMAF显示出aSMA和p-MLC2的显着上调，证实了肌成纤维细胞和细胞收缩性信号的增加pytxt♀ccFAs的量化显示MAFs中FAs的平均面积更大（图L和M），支持CRCMAFs被高度激活
2、晚期CRC患者的ECM重构和硬化特征
?为了鉴定与肝转移相关的基因表达特征，我们对CRC患者的pTU和LM进行了RNA测序（RNA-seq）使用通路相互作用数据库(PID)对LM中上调基因进行的基因集分析(GSA)揭示了整合素信号传导的显着富集为了进一步表征成纤维细胞的基因表达，我们在成功富集后对分离的原代CAF和MAF进行了RNA-
?我们鉴定了3，721个差异表达的基因pytxt♀ccGO确定了MAF中上调的肌成纤维细胞/ECM重塑特征pytxt♀ccKEGG确定了ECM-受体相互作用和FA特征和PID确定了整合素信号（图H）此外，基因集富集分析(GSEA)还揭示了差异表达基因的肌动蛋白介导的细胞收缩、FA、ECM成分、肌生成和血管生成特征的强烈富集（图I-M）
3、MAFs增加微环境硬度，支持血管生成
?我们进行了凝胶重塑分析，并观察到MAF显示出更密集、更复杂的F-肌动蛋白网络（图A），并且可以比CAF更大程度地收缩凝胶（图B）在新鲜和冷冻保存的组织中，我们观察到LM的基质硬度显着增加（图C-D）基质硬度与来自同一患者的样本中的COL-I、aSMA和p-MLC2表达相关（图E-G）
?基质硬化调节EC增殖、血管生成、血管生长和分支，为了研究这种联系，我们评估了LM中的脉管系统，并观察了基质硬度和CD31血管面积之间的相关性（图H）当在凝胶内培养时，允许成纤维细胞重塑基质，MAFs诱导EC发芽的程度显着高于CAFs（图I-K）因此，MAF支持伴随局部ECM重塑的细胞因子产生血管生成
4、肾素-血管紧张素系统抑制目标成纤维细胞
?对新鲜分离的MAF与肝源性成纤维细胞的qPCR分析显示RAS系统的所有关键成分（血管紧张素原[AGT]、肾素[REN]、血管紧张素转化酶[ACE]和AT-1[AGTR1]的表达显着增加）此外，MAFs表达的AGT和AGTR1水平显着